ਨਿਰਧਾਰਨ
ਟੈਸਟ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਅਤੇ ਵਿਆਖਿਆ
ਕਦਮ 1 ਟੈਸਟ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ
1.1 ਘੋਲ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਧੋਵੋ
Working ਇਕਾਗਰਤਾ wਸੁਆਹ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਤਰਲ:ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਧੋਣ ਵਾਲੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (20-25 ਡਿਗਰੀ) 'ਤੇ ਬਹਾਲ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਨੂੰ ਇਕਸਾਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਬਰਾਬਰ ਹਿਲਾ ਦੇਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਫਿਰ ਸ਼ੁੱਧ ਪਾਣੀ ਨਾਲ 20 ਵਾਰ ਸੰਘਣੇ ਧੋਣ ਵਾਲੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰੋ (ਉਦਾਹਰਣ ਵਜੋਂ, 95 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸ਼ੁੱਧ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ 5ml ਸੰਘਣਾ ਧੋਣ ਵਾਲਾ ਘੋਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ), ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ, ਅਤੇ ਪਤਲੇ ਧੋਣ ਵਾਲੇ ਤਰਲ ਨੂੰ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ 2-8 ਡਿਗਰੀ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
1.2 ਨਮੂਨਾ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
① ਪੂਰੇ ਜਾਨਵਰ ਦਾ ਖੂਨ ਲਿਆ ਗਿਆ, 10 ਮਿੰਟ ਲਈ 4000rpm 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਸੀਰਮ ਨੂੰ ਬਿਨਾਂ ਹੀਮੋਲਾਈਸਿਸ ਦੇ ਕੁਦਰਤੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੀ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
② ਸੀਰਮ ਡਾਇਲਿਊਸ਼ਨ ਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਸੀਰਮ ਨੂੰ 50 ਵਾਰ ਪਤਲਾ ਕਰੋ (ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ: 147ul ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਪਤਲੇ ਵਿੱਚ ਟੈਸਟ ਕਰਨ ਲਈ ਸੀਰਮ ਦਾ 3ul ਜੋੜੋ)।
ਨੋਟ: ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਅਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ
1.3 ਟੈਸਟ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ
①ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਲੇਬਲ ਲਓ (ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਈ ਵਾਰ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ), ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਲੇਬਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਪਤਲੇ ਸੀਰਮ ਦਾ 100ul ਜੋੜੋ, ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਲਈ ਦੋ ਖੂਹ ਸੈੱਟ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ 100ul ਜੋੜੋ। ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਢੱਕਣ ਲਈ ਸੀਲਿੰਗ ਪਲੇਟ ਫਿਲਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਖੂਹ ਵਿੱਚ ਹਿਲਾਓ, ਅਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 37 ਡਿਗਰੀ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
②ਸੀਲਿੰਗ ਪਲੇਟ ਫਿਲਮ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹੋ, ਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਘੋਲ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਿਲਾਓ, ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 300µl ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਧੋਣ ਵਾਲਾ ਤਰਲ ਪਾਓ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਤਰਲ ਨੂੰ ਖੂਹ ਵਿੱਚ ਸੁੱਟ ਦਿਓ। ਉਪਰੋਕਤ ਕਦਮਾਂ ਨੂੰ 5 ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਓ, ਅਤੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਾਫ਼ ਸੋਖਣ ਵਾਲੇ ਕਾਗਜ਼ 'ਤੇ ਸੁਕਾਓ।
③ ਪਤਲਾ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਕਨਜੁਗੇਟ: ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਕਨਜੁਗੇਟ (80×) ਨੂੰ 80 ਵਾਰ ਪਤਲਾ ਕਰੋ (ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ: 10ul ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਕਨਜੁਗੇਟ ਕੰਜੂਗੇਟ + 790ul ਨਮੂਨਾ ਪਤਲਾ, ਲੋੜੀਂਦੀ ਖਾਸ ਮਾਤਰਾ ਟੈਸਟ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਗਿਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ), ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ ਇੱਕ ਪਾਸੇ ਰੱਖ ਦਿਓ।
④ ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 100µl ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਕਨਜੁਗੇਟ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਢੱਕੋ, ਅਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 37 ਡਿਗਰੀ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
⑤ਵਾਸ਼ਿੰਗ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪਲੇਟ, ਖਾਸ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਉਪਰੋਕਤ ② ਵਾਂਗ ਹੀ ਹੈ.
⑥ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 100µl ਸਬਸਟਰੇਟ ਘੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਢੱਕੋ ਅਤੇ ਰੋਸ਼ਨੀ ਤੋਂ 37 ਡਿਗਰੀ ਦੂਰ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
ਕਦਮ 2 ਨਤੀਜੇ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ
ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਦਾ OD450 ਮੁੱਲ 96-ਵੈਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਰੀਡਰ 'ਤੇ ਪੜ੍ਹਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
2.1 ਪ੍ਰਮਾਣਿਕਤਾ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦਾ ਔਸਤ OD450nm ਮੁੱਲ <0.25 ਸੀ ਅਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦਾ ਔਸਤ OD450nm ਮੁੱਲ 0.6 ਤੋਂ ਵੱਧ ਜਾਂ ਇਸਦੇ ਬਰਾਬਰ ਸੀ, ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜੇ ਵੈਧ ਸਨ। ਨਹੀਂ ਤਾਂ, ਟੈਸਟ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.
2.2 ਗਣਨਾ ਵਿਧੀ
ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਲਈ, ਸਹੀ ਕੀਤੇ ਨਮੂਨੇ ਅਤੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਮੁੱਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਅਨੁਸਾਰ S/P ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ:
2.3 ਨਤੀਜੇ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ
ਜਦੋਂ S/P <0.2, ਇਸ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਜਦੋਂ S/P > 0.3, ਇਸ ਨੂੰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਜਦੋਂ 0.2 S/P ਤੋਂ ਘੱਟ ਜਾਂ ਇਸ ਦੇ ਬਰਾਬਰ 0.3 ਤੋਂ ਘੱਟ ਜਾਂ ਬਰਾਬਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਸ ਨੂੰ ਸ਼ੱਕੀ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇੱਕ ਹਫ਼ਤੇ ਬਾਅਦ ਨਮੂਨਾ ਲੈਣ ਅਤੇ ਟੈਸਟ ਕਰਨ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਗਰਮ ਟੈਗਸ: ਛੂਤ ਵਾਲੀ ਬੋਵਾਈਨ ਰਾਈਨੋਟ੍ਰੈਚਾਈਟਿਸ ਵਾਇਰਸ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਐਲੀਸਾ ਖੋਜ ਕਿੱਟ, ਚੀਨ ਛੂਤ ਵਾਲੀ ਬੋਵਾਈਨ ਰਾਇਨੋਟਰਾਚੀਟਿਸ ਵਾਇਰਸ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਐਲੀਸਾ ਖੋਜ ਕਿੱਟ ਸਪਲਾਇਰ, ਨਿਰਮਾਤਾ, ਫੈਕਟਰੀ
